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Vaccinia Capping Enzyme

  • Cat.No.ON-028
  • Cas.No.
  • 來源重組大腸桿菌
  • 純度>95% by SDS-PAGE
  • 儲存條件-20℃
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產品描述:Vaccinia Capping enzyme是經大腸桿菌表達、純化的來源于牛痘病毒的重組蛋白。能特異性將7-甲基鳥苷酸帽子結構(cap 0) 加至RNA的5'端。cap結構有助于真核生物mRNA的穩定,轉運,翻譯。Vaccinia Capping enzyme由D1R,D12L雙亞基組成,具有三種酶活性(RNA三磷酸酶活性,鳥苷酸轉移酶活性;鳥嘌呤甲基轉移酶活性)。在體外轉錄,加帽過程需要Vaccinia Capping enzyme,GTP,甲基供體(SAM)。

來源:重組大腸桿菌

規格:10U/μL

活性單位定義:1單位酶活定義為37℃,1小時摻入10 pmols GTP到80nt轉錄產物所用的酶量。

酶存儲緩沖液:20mM Tris-HCl (pH8.0), 0.1mM EDTA, 100mM NaCl, 1mM DTT, 0.1%(v/v) Triton X-100, 50%(v/v) glycerol.

配套溶液:10X Capping Buffer, Cat#ON-073, 500mM Tris-HCl, pH8.0, 50mM KCl, 10mM MgCl2, 10mM DTT; S-adenosylmethionine (SAM), 32mM, Cat#ON-074; 10mM GTP, ON-075.


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10X Capping Buffer, Cat#ON-073

10mM GTP, Cat#ON-075

S-adenosylmethionine (SAM),32mM, Cat#ON-074

1. 反應體系中不能含有EDTA;

2. 如為了RNA的穩定性,而加入核糖核酸酶抑制劑,按手冊中反應體系加入至終濃度為1U/μL即可;

3. 在pH7.0-8.0,SAM不穩定,每次反應前需要新稀釋SAM至2mM;

4. 在反應前,應對RNA進行熱處理,保證轉錄產物的5'末端二級結構打開;對高二級結構的RNA可以提高熱變性條件,如65℃ 20分鐘,或75℃ 10分鐘,或85℃ 5分鐘;

5. Vaccinia Capping Enzyme 和 2'-O-methyltransferase 可以一起反應用于生產Cap1結構的RNA;

6. 對部分已知的含有復雜5'結構的RNA,反應時間可以延長至3小時。

儲藏溫度:-20℃

質控檢測:無DNase,RNase污染

純度:SDS-PAGE純度:大于95%

1. Otto J.P. Kyrieleis, Jonathan  Chang, Marcos de la Pena, et al. Structure. 22, 452-465(2014).

2. Konarska, M.M. et al., (1984) Cell 38, 731.

3. Kuge, H. et al., (1998) Nucl. Acids Res. 26, 3208.

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